GRO1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420697

Panoramica

Il gene murino **Cxcl1** codifica **GRO1**, una chemochina CXC secreta che segnala principalmente attraverso **CXCR2**, promuovendo la chemiotassi e l’attivazione dei neutrofili e di altre popolazioni mieloidi. GRO1 partecipa alla segnalazione dell’immunità innata, amplifica le reti di citochine infiammatorie e contribuisce all’attivazione endoteliale e all’extravasazione dei leucociti tramite vie collegate a **NF-κB** e **MAPK**. Un’espressione deregolata di **CXCL1/GRO1** è associata a danno tissutale infiammatorio, alterazioni della difesa dell’ospite e cambiamenti del microambiente rilevanti per l’infezione e la biologia del cancro. Nei sistemi sperimentali, **Cxcl1** è ampiamente utilizzato per studiare i gradienti chemiotattici, il traffico leucocitario e il rimodellamento guidato dall’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRO1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cxcl1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cxcl1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cxcl1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRO1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cxcl1 per lo studio della segnalazione di GRO1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cxcl1 critici per la funzione di GRO1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cxcl1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GRO1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GRO1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cxcl1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GRO1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GRO1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cxcl1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cxcl1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.