GROα Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403256-ACT

CXCL1 codifica la chemochina GROα, un ligando CXC ELR+ secreto che si lega a CXCR2 promuovendo la chemiotassi dei neutrofili, l’attivazione endoteliale e le reti di citochine infiammatorie. GROα partecipa a cascate di segnalazione dell’immunità innata, incluse le vie NF-κB e MAPK, modulando il reclutamento dei leucociti e il rimodellamento tissutale durante l’infiammazione acuta e cronica. Un’espressione deregolata di CXCL1/GROα è stata associata a microambienti infiammatori e ad alterate interazioni tra stroma e sistema immunitario osservate in molteplici contesti patologici, rendendola un nodo molecolare utile per analizzare la migrazione cellulare guidata dalle chemochine e la segnalazione paracrina. Modelli in vitro e in vivo sfruttano spesso CXCL1 per studiare la percezione dei gradienti, il traffico delle cellule mieloidi e i cambiamenti associati all’infiammazione nei compartimenti epiteliale e vascolare.

GROα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CXCL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GROα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CXCL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CXCL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GROα. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CXCL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GROα nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GROα nelle cellule tumorali con espressione di CXCL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.