GRK 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406525

Panoramica

GRK1 codifica la chinasi 1 dei recettori accoppiati a proteine G (chinasi della rodopsina), una chinasi serina/treonina che fosforila la rodopsina attivata dalla luce per favorire il legame con l’arrestina e la tempestiva terminazione della fototrasduzione nei fotorecettori a bastoncello. Questa attività è centrale nella desensibilizzazione dei GPCR e nell’adattamento del segnale nella retina, coordinando le cinetiche di recupero e limitando una segnalazione prolungata a valle. L’alterazione della funzione di GRK1 è associata a patologie retiniche ereditarie, inclusa la cecità notturna congenita stazionaria, e riflette una compromessa disattivazione della segnalazione dei bastoncelli. GRK1 è quindi ampiamente studiato nei percorsi che regolano i GPCR, nelle risposte allo stress collegate al ciclo visivo e nell’omeostasi dei fotorecettori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRK 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GRK1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GRK1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GRK1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRK 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GRK1 per lo studio della segnalazione di GRK 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GRK1 critici per la funzione di GRK 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GRK1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GRK 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GRK 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GRK1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GRK 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GRK 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GRK1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GRK1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.