GRB10 Plasmide Double Nickase (h): sc-401904-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRB10 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GRB10 Double Nickase Plasmid (h) e il GRB10 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GRB10. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRB10 Antibody (C-11): sc-74509
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRB10 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401904-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRB10 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401904-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRB10 (growth factor receptor bound protein 10) è una proteina adattatrice che si lega alle tirosin-chinasi recettoriali attivate, inclusi i recettori dell’insulina e di IGF-1, per modulare l’intensità e la durata della segnalazione a valle. Attraverso i suoi domini PH e SH2 e le regioni ricche in prolina, GRB10 interagisce con le vie PI3K–AKT–mTOR e MAPK e influenza il traffico recettoriale, la degradazione dipendente dall’ubiquitina e il controllo a feedback della segnalazione dei fattori di crescita. Queste attività collegano GRB10 alla regolazione della proliferazione e sopravvivenza cellulare e dell’omeostasi metabolica; alterazioni dell’espressione o della segnalazione di GRB10 sono implicate nella disregolazione di vie associate al cancro e nelle perturbazioni dell’asse insulina/IGF in modelli di malattie metaboliche. GRB10 è inoltre studiato in relazione alla regolazione della crescita durante lo sviluppo e a fenotipi associati all’imprinting.
GRB10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GRB10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GRB10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GRB10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GRB10 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.