GRAF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403652

Panoramica

ARHGAP26 codifica GRAF, una proteina attivatrice della GTPasi Rho (Rho GTPase-activating protein) che riduce la segnalazione della famiglia Rho per coordinare il rimodellamento del citoscheletro di actina, il traffico di membrana e i cambiamenti della morfologia cellulare. Attraverso la sua attività GAP e le interazioni con regolatori dell’endocitosi e del citoscheletro, GRAF collega le vie dipendenti da Rho all’endocitosi mediata da clatrina e alla dinamica delle adesioni, influenzando migrazione e polarità cellulare. Alterazioni della funzione di ARHGAP26 sono state associate a un controllo citoscheletrico deregolato in processi correlati al cancro e sono anche implicate nelle neoplasie ematologiche tramite riarrangiamenti genici ricorrenti, a supporto dell’indagine del suo ruolo nel riassetto delle reti di segnalazione e nella trasformazione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRAF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ARHGAP26 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ARHGAP26 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ARHGAP26 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRAF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ARHGAP26 per lo studio della segnalazione di GRAF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ARHGAP26 critici per la funzione di GRAF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ARHGAP26 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GRAF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GRAF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ARHGAP26. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GRAF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GRAF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ARHGAP26 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ARHGAP26 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.