GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Plasmide Double Nickase (h): sc-400071-NIC

NR3C1 codifica il recettore dei glucocorticoidi (GR), un recettore nucleare attivato dal legando che trasduce i segnali del cortisolo e dei glucocorticoidi sintetici in programmi trascrizionali dipendenti dal contesto. Dopo il legame con l'ormone, il GR va incontro ad attivazione dipendente da chaperoni, traslocazione nel nucleo e legame al DNA in corrispondenza degli elementi di risposta ai glucocorticoidi, modulando al contempo altri fattori di trascrizione come NF-κB e AP-1. Attraverso questi meccanismi, il GR regola la segnalazione infiammatoria e immunitaria, il metabolismo cellulare, le risposte allo stress legate al ritmo circadiano e l'apoptosi, integrando segnali provenienti dalle vie endocrine e citochiniche. Un'alterata segnalazione o espressione di NR3C1 è implicata nella resistenza ai glucocorticoidi e in una regolazione anomala dell'asse dello stress, con rilevanza per i disturbi infiammatori e per i tumori sensibili agli ormoni, nei quali il GR può influenzare la proliferazione e la risposta alle terapie.

GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NR3C1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NR3C1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NR3C1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NR3C1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.