GPT2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-403739-LAC-2

La GPT2 umana (glutammato piruvato transaminasi 2; alanina aminotransferasi mitocondriale) codifica un enzima PLP-dipendente che catalizza la transaminazione reversibile tra alanina e α-chetoglutarato per generare piruvato e glutammato, collegando il turnover degli amminoacidi al flusso di carbonio mitocondriale. L’attività di GPT2 si integra con programmi metabolici centrali, tra cui il ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA), l’anaplerosi e la gestione dell’azoto, influenzando così l’equilibrio redox cellulare e l’adattamento bioenergetico in condizioni di stress nutrizionale. Un’espressione o una funzione disregolata di GPT2 è stata implicata nel rimodellamento metabolico osservato in stati proliferativi e in fenotipi neurologici in cui risulta alterato il metabolismo mitocondriale degli amminoacidi. L’editing genico di GPT2 supporta studi meccanicistici del metabolismo mitocondriale, analisi dei flussi basate su traccianti e l’indagine delle dipendenze metaboliche in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale GPT2 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GPT2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GPT2 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GPT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GPT2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GPT2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.