Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GPR84 Plasmide Double Nickase (h): sc-401953-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR84 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR84 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR84 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR84. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPR84 Antibody (1D9): sc-293447
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR84 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401953-NIC | 20 µg | $410.00 |
GPR84 codifica un recettore accoppiato a proteina G di tipo rodopsina, attivato dagli acidi grassi a catena media, che si accoppia prevalentemente alla segnalazione Gi/o per modulare il cAMP e i programmi infiammatori a valle. Nei tipi cellulari mieloidi e in altre cellule immunoresponsivi, GPR84 influenza la chemiotassi, la produzione di citochine e il crosstalk tra metabolismo e infiammazione attraverso vie di segnalazione che convergono sulla regolazione trascrizionale dipendente da MAPK e NF-κB. Un’attività alterata di GPR84 è stata associata a risposte immunitarie innate disregolate e a microambienti infiammatori in diversi contesti patologici, supportandone l’uso come strumento molecolare per studiare la segnalazione immunometabolica. In quanto recettore di superficie che integra segnali derivati dai lipidi, GPR84 è inoltre rilevante per analizzare come la disponibilità di nutrienti plasmi lo stato delle cellule immunitarie e il rimodellamento tissutale.
GPR84 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR84 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR84. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR84. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR84 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.