GPR84 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401953

Panoramica

GPR84 codifica un recettore accoppiato a proteine G che viene attivato da acidi grassi a catena media ed è particolarmente espresso nelle cellule della linea mieloide, collegando la percezione dei lipidi alla segnalazione dell’immunità innata. In seguito alla stimolazione, GPR84 attiva vie mediate da GPCR che modulano la segnalazione dei secondi messaggeri e i programmi trascrizionali a valle che controllano la produzione di citochine, la chemotassi e l’attivazione dei macrofagi. Questo recettore è stato studiato nel contesto del rimodellamento metabolico associato all’infiammazione e della polarizzazione delle cellule immunitarie all’interno dei microambienti tissutali. Un’attività alterata di GPR84 è stata riportata in diversi modelli di malattie infiammatorie e fibrotiche, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per indagare le vie immunometaboliche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR84 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPR84 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPR84 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPR84 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR84.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPR84 per lo studio della segnalazione di GPR84, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPR84 critici per la funzione di GPR84
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPR84 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR84 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR84 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPR84. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR84 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR84 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPR84 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPR84 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.