GPR78 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405837

Panoramica

GPR78 codifica un recettore accoppiato a proteine G coinvolto nella trasduzione del segnale attraverso la membrana e nel coordinamento delle risposte cellulari a stimoli extracellulari. In quanto GPCR, GPR78 è in grado di modulare a valle vie di secondi messaggeri, incluse le cascate di segnalazione legate al cAMP e al calcio, con potenziali effetti su programmi di proliferazione, sopravvivenza e motilità cellulare. Alterazioni dell’espressione dei GPCR o delle dinamiche di segnalazione sono frequentemente associate a una deregolazione dell’omeostasi tissutale e a processi oncogenici, rendendo GPR78 rilevante per studi meccanicistici in biologia del cancro e per fenotipi di segnalazione correlati. La caratterizzazione della funzione di GPR78 supporta inoltre gli sforzi di mappatura delle vie che collegano l’attività recettoriale ad adattamenti trascrizionali e metabolici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR78 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPR78 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPR78 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPR78 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR78.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPR78 per lo studio della segnalazione di GPR78, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPR78 critici per la funzione di GPR78
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPR78 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR78 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR78 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPR78. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR78 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR78 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPR78 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPR78 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.