GPR56 Plasmide Double Nickase (h): sc-406370-NIC

ADGRG1 codifica GPR56, un recettore di adesione accoppiato a proteine G, arricchito nelle linee cellulari neurali e immunitarie, che integra segnali della matrice extracellulare con la segnalazione intracellulare. GPR56 partecipa alle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice, modulando processi quali la migrazione neuronale, lo sviluppo corticale e l’organizzazione del citoscheletro tramite vie associate ai GPCR, incluse le dinamiche dell’actina guidate da RhoA. In ambito ematopoietico, GPR56 è stato implicato nella regolazione dell’adesione, del traffico e degli stati funzionali di sottopopolazioni leucocitarie, sostenendo lo studio del posizionamento delle cellule immunitarie e dei programmi di attivazione. Un’attività deregolata di ADGRG1/GPR56 è stata associata a disturbi del neurosviluppo e ad alterazioni del comportamento delle cellule tumorali, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici della segnalazione di adesione e della differenziazione specifica di linea.

GPR56 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADGRG1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADGRG1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADGRG1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADGRG1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.