GPR55 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-432690-ACT

Mouse **Gpr55** codifica per **GPR55**, un recettore atipico accoppiato a proteine G (GPCR) implicato nel riconoscimento dei lipidi e nella trasduzione del segnale a valle di ligandi endogeni come la lisofosfatidilinositolo. L’attività di GPR55 può attivare vie dipendenti da Gα12/13 e RhoA, modulare la dinamica del calcio intracellulare e influenzare la segnalazione MAPK/ERK, collegando l’attivazione del recettore a cambiamenti nell’organizzazione del citoscheletro e nei programmi trascrizionali. In contesti immunitari e del sistema nervoso, GPR55 è stato associato alla regolazione della segnalazione infiammatoria, della migrazione cellulare e dell’eccitabilità neuronale. La disregolazione della segnalazione mediata da GPR55 è stata studiata in modelli di infiammazione, elaborazione del dolore e omeostasi metabolica, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici di fenotipi guidati dai GPCR.

GPR55 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gpr55 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GPR55 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gpr55 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gpr55, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GPR55. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gpr55 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GPR55 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GPR55 nelle cellule tumorali con espressione di Gpr55 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.