Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
GPR43 Plasmide Double Nickase (h): sc-401858-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR43 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR43 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR43 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FFAR2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPR43 Antibody (3B3): sc-293202
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR43 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401858-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR43 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401858-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FFAR2 umano codifica GPR43, un GPCR che rileva gli acidi grassi a catena corta, attivato da acetato e propionato e accoppiato principalmente alla segnalazione mediata da Gαi/o e Gαq. GPR43 regola la soppressione del cAMP, la mobilizzazione del calcio dipendente da PLC e i programmi a valle collegati a MAPK e NF-κB, che modellano la chemiotassi, il rilascio di citochine e le risposte immunitarie legate alla barriera. L’espressione nelle linee mieloidi e in contesti epiteliali collega FFAR2 al riconoscimento dei metaboliti microbici e al crosstalk metabolico-infiammatorio. Un’alterata regolazione della segnalazione di GPR43 è stata associata a un reclutamento leucocitario modificato e a fenotipi infiammatori rilevanti per l’infiammazione gastrointestinale, l’infiammazione delle vie aeree e la disfunzione metabolica.
GPR43 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FFAR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FFAR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FFAR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FFAR2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.