GPR40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401434

Übersicht

FFAR1 kodiert den Rezeptor für freie Fettsäuren 1 (GPR40), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der durch mittel- und langkettige Fettsäuren aktiviert wird und hauptsächlich an die Gq/11-Signalübertragung koppelt. Nach Aktivierung fördert GPR40 die Aktivität der Phospholipase C, die Mobilisierung von intrazellulärem Calcium sowie nachgeschaltete Kinase-Signalwege, die die Kopplung von Stimulus und Sekretion sowie zelluläre metabolische Antworten regulieren. In pankreatischen Inseln und verwandten metabolischen Geweben integriert dieser Rezeptor lipidbasierte Signale mit der Nährstoffsensorik, um die Dynamik der Insulinsekretion und umfassendere Netzwerke der Glukosehomöostase zu beeinflussen. Eine fehlregulierte FFAR1/GPR40-Signalgebung wurde mit metabolischen krankheitsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter veränderte Betazellfunktion und lipidgetriebene inflammatorische Signalgebung, was seine Relevanz für mechanistische Studien in der Diabetes- und Adipositasforschung unterstreicht.

Das GPR40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FFAR1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FFAR1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FFAR1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR40-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FFAR1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR40-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FFAR1-Exone abzielen, die für die GPR40-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FFAR1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPR40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FFAR1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR40 HDR-Plasmid (h) und GPR40 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FFAR1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FFAR1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.