GPR40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401434

Panoramica

FFAR1 codifica il recettore 1 degli acidi grassi liberi (GPR40), un recettore accoppiato a proteina G attivato da acidi grassi a catena media e lunga che si accoppia principalmente alla segnalazione Gq/11. In seguito all’attivazione, GPR40 promuove l’attività della fosfolipasi C, la mobilizzazione del calcio intracellulare e l’attivazione di vie chinasi a valle che regolano l’accoppiamento stimolo-secrezione e le risposte metaboliche cellulari. Nelle isole pancreatiche e in altri tessuti metabolici correlati, questo recettore integra segnali derivati dai lipidi con il nutrient sensing per influenzare la dinamica della secrezione di insulina e reti più ampie dell’omeostasi del glucosio. Una segnalazione FFAR1/GPR40 deregolata è stata associata a fenotipi legati alle malattie metaboliche, tra cui alterazioni della funzione delle cellule beta e segnalazione infiammatoria indotta dai lipidi, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici nella ricerca su diabete e obesità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR40 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FFAR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FFAR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FFAR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR40.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FFAR1 per lo studio della segnalazione di GPR40, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FFAR1 critici per la funzione di GPR40
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FFAR1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FFAR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR40 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR40 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FFAR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FFAR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.