GPR4 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-435597-LAC

Il gene murino **Gpr4** codifica **GPR4**, un recettore accoppiato a proteine G sensibile ai protoni, in grado di rilevare l’acidificazione extracellulare e di attivare le vie di segnalazione cAMP e Rho per modulare il comportamento delle cellule endoteliali e immunitarie. L’attivazione di GPR4 influenza il tono vascolare, la funzione di barriera, il traffico dei leucociti e l’espressione di geni infiammatori attraverso percorsi che possono intersecarsi con programmi regolati da MAPK e NF-κB. Poiché l’acidosi tissutale è una caratteristica comune di ipossia e infiammazione, GPR4 viene spesso studiato in contesti quali le risposte allo stress associate all’ischemia, i microambienti infiammatori cronici e il rimodellamento vascolare associato ai tumori. Questi ruoli rendono GPR4 un nodo utile per analizzare la segnalazione dipendente dal pH e gli adattamenti trascrizionali in modelli murini e in sistemi cellulari pertinenti.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR4 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Gpr4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR4 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Gpr4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GPR4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Gpr4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.