GPR39 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410802-ACT

Il GPR39 umano codifica un recettore accoppiato a proteine G sensibile allo zinco, che integra la disponibilità extracellulare di Zn2+ con la segnalazione intracellulare per modulare l’eccitabilità cellulare, la secrezione e i programmi di sopravvivenza. Una volta attivato, GPR39 può accoppiarsi alle vie associate a Gq/11 e Gs, promuovendo la segnalazione del calcio dipendente dalla fosfolipasi C e le cascate cAMP/PKA, che intersecano le risposte MAPK/ERK e trascrizionali. Questi output di segnalazione sono stati collegati alla regolazione dell’omeostasi epiteliale e metabolica, della segnalazione infiammatoria e della funzione neuronale, rendendo GPR39 un nodo utile per studiare le dinamiche delle vie guidate dai GPCR. In letteratura, un’espressione o una segnalazione alterata di GPR39 è stata associata a fenotipi cardiometabolici, a processi della barriera gastrointestinale e a esiti neurocomportamentali, a supporto della sua rilevanza per la modellizzazione meccanicistica delle malattie in sistemi cellulari.

GPR39 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GPR39 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GPR39 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GPR39 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GPR39, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GPR39. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GPR39 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GPR39 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GPR39 nelle cellule tumorali con espressione di GPR39 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.