GPR35 Plasmide Double Nickase (h): sc-416792-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR35 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR35 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR35 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR35. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR35 Plasmide Double Nickase (h) | sc-416792-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR35 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416792-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR35 codifica un recettore accoppiato a proteine G di tipo rodopsina, particolarmente espresso nei tessuti immunitari e gastrointestinali, che si accoppia prevalentemente a vie di segnalazione mediate da Gi/o e da β-arrestina. L’attivazione del recettore modula vie di secondi messaggeri che convergono sulla segnalazione MAPK/ERK, sui flussi di calcio e su programmi chemiotattici, influenzando la produzione di citochine e il traffico dei leucociti. GPR35 è stato studiato nel contesto dell’infiammazione mucosale e della regolazione della barriera, e la sua espressione è stata riportata in diversi microambienti tumorali, dove potrebbe modellare la segnalazione metabolica e infiammatoria. Queste caratteristiche rendono GPR35 un bersaglio utile per analizzare l’immunoregolazione guidata dai GPCR, le risposte epiteliali e il crosstalk del microambiente in modelli cellulari umani.
GPR35 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR35 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR35. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR35. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR35 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.