GPR30 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402502-ACT

GPER1 codifica GPR30 (GPER), un recettore degli estrogeni associato alla membrana che media una segnalazione estrogenica rapida e non genomica e si integra con i programmi trascrizionali canonici responsivi agli estrogeni. L’attivazione di GPR30 può coinvolgere cAMP/PKA, la transattivazione di EGFR, MAPK/ERK, PI3K/AKT e flussi di Ca²⁺ intracellulare, influenzando proliferazione, migrazione, metabolismo e segnalazione infiammatoria in modo dipendente dal tipo cellulare. La disregolazione della segnalazione GPER1/GPR30 è stata implicata in tumori ormono‑responsivi, disfunzioni cardiovascolari e metaboliche e processi neuroinfiammatori, rendendolo un nodo utile per analizzare il crosstalk tra vie di segnalazione guidate dagli estrogeni. In quanto recettore di segnalazione associato a biomarcatori, GPR30 è spesso studiato per il suo impatto sulle transizioni di stato cellulare, sul trafficking dei recettori e sulle reti geniche di risposta allo stress.

GPR30 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GPER1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GPR30 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GPER1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GPER1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GPR30. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GPER1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GPR30 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GPR30 nelle cellule tumorali con espressione di GPER1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.