GPR20 Plasmide Double Nickase (h): sc-407471-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR20 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR20 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR20 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR20. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR20 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR20 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR20 codifica un recettore orfano accoppiato a proteine G (GPCR), arricchito nel sistema nervoso centrale, che si ritiene moduli la segnalazione intracellulare tramite proteine G eterotrimeriche e vie di secondi messaggeri a valle, come cAMP/PKA e MAPK/ERK. Influenzando la trasduzione del segnale mediata da recettori, GPR20 può incidere sulla comunicazione neuronale, sui programmi di differenziamento cellulare e sulle risposte trascrizionali che integrano segnali extracellulari. La deregolazione della segnalazione dei GPCR, inclusa l’alterata espressione o attività dei recettori orfani, è stata studiata nel contesto della biologia neurodevelopmentale e neuropsichiatrica, nonché in sistemi più ampi in cui le reti di GPCR determinano transizioni dello stato cellulare. In quanto recettore di membrana con un’annotazione limitata del ligando, GPR20 viene spesso studiato mediante perturbazioni genetiche per definire la connettività delle vie di segnale e ruoli funzionali dipendenti dal contesto.
GPR20 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR20 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR20. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR20. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR20 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.