GPR174 Plasmide Double Nickase (h): sc-413678-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR174 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR174 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR174 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR174. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR174 Plasmide Double Nickase (h) | sc-413678-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR174 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-413678-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR174 codifica un recettore accoppiato alle proteine G (GPCR) espresso in modo marcato in sottopopolazioni di cellule immunitarie, dove contribuisce alla trasduzione del segnale che modella l’attivazione delle cellule T, la produzione di citochine e l’omeostasi immunitaria. In quanto recettore di membrana, GPR174 interagisce con proteine G eterotrimeriche per modulare vie di secondi messaggeri come la segnalazione cAMP/PKA e i programmi trascrizionali a valle che influenzano lo stato cellulare e il traffico/migrazione. La deregolazione della segnalazione dei GPCR nei linfociti è rilevante per la biologia infiammatoria e autoimmune, e un’alterata attività di GPR174 è stata collegata, in studi genetici, a variazioni del fenotipo immunitario. Di conseguenza, GPR174 rappresenta un nodo utile per indagare il controllo, mediato dai recettori, delle risposte immunitarie adattative e della differenziazione funzionale dei linfociti.
GPR174 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR174 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR174. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR174. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR174 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.