GPR17 Plasmide Double Nickase (h): sc-402977-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR17 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR17 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR17 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR17. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPR17 Antibody (A-10): sc-514723
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR17 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402977-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR17 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402977-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR17 codifica un recettore accoppiato a proteine G di tipo rodopsina che integra segnali extracellulari purinergici e correlati ai leucotrieni cisteinilici per modulare vie intracellulari di secondi messaggeri, incluse la segnalazione mediata da cAMP e quella calcio-dipendente. Nel sistema nervoso centrale, l’espressione di GPR17 è arricchita nelle cellule della linea oligodendrogliale ed è implicata nel coordinare la tempistica dei programmi di differenziazione e mielinizzazione, collegando l’attività del recettore a segnali neuroinfiammatori e al rimodellamento tissutale. Il recettore è stato inoltre studiato in contesti di risposta allo stress ischemico e di segnalazione infiammatoria, in cui alterazioni della segnalazione dei GPCR possono rimodellare gli stati di attivazione della glia e le reti trascrizionali a valle. Di conseguenza, GPR17 rappresenta un bersaglio utile per analizzare la regolazione, guidata dai GPCR, dello sviluppo neurale, della segnalazione associata all’infiammazione e delle transizioni di destino cellulare.
GPR17 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR17 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR17. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR17. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR17 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.