GPR17 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402977-ACT

GPR17 codifica un recettore accoppiato a proteine G implicato nella segnalazione purinergica e dei leucotrieni cisteinilici, integrando segnali extracellulari di nucleotidi e mediatori lipidici in vie intracellulari basate su secondi messaggeri. Nel sistema nervoso centrale, GPR17 è associato alla progressione della linea oligodendrogliale e ai programmi di mielinizzazione, influenzando le risposte cellulari a segnali legati al danno e a microambienti infiammatori. La sua attività si interseca con reti regolate dai GPCR che modulano la segnalazione dei nucleotidi ciclici, le cascate MAPK e processi chemiotattici o di risposta allo stress a seconda del contesto cellulare. L’espressione o la segnalazione disregolata di GPR17 è stata studiata in condizioni neuroinfiammatorie e demielinizzanti, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla biologia gliale e sulla segnalazione associata al danno.

GPR17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GPR17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GPR17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GPR17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GPR17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GPR17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GPR17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GPR17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GPR17 nelle cellule tumorali con espressione di GPR17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.