GPR125 Plasmide Double Nickase (h): sc-408335-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR125 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR125 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR125 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADGRA3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR125 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408335-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR125 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408335-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADGRA3 codifica per il recettore di adesione accoppiato a proteine G GPR125, un recettore di membrana multipasso implicato nelle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice e nella modulazione della segnalazione intracellulare attraverso vie associate ai GPCR. In quanto GPCR di adesione, GPR125 è collegato alla regolazione della polarità cellulare, della migrazione e dei programmi di differenziamento, con ruoli riportati nella biologia delle cellule epiteliali e delle cellule staminali/progenitrici. L’alterazione dell’espressione di ADGRA3/GPR125 è stata studiata nel contesto della biologia tumorale e del rimodellamento tissutale, dove cambiamenti nella segnalazione legata all’adesione possono influenzare il comportamento invasivo e le risposte del microambiente. Queste caratteristiche rendono ADGRA3 un bersaglio utile per analizzare le reti di segnalazione dipendenti dall’adesione e i programmi trascrizionali associati alla linea cellulare in modelli cellulari umani.
GPR125 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADGRA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADGRA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADGRA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADGRA3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.