GPR120 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401362-ACT

FFAR4 codifica GPR120, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) sensibile agli acidi grassi a catena lunga, che si associa a vie di segnalazione dipendenti da Gαq/11 e da β-arrestina per modulare la dinamica del calcio intracellulare e i programmi trascrizionali. Nei tessuti metabolici e nelle cellule immunitarie, GPR120 influisce sul rilevamento dei lipidi, sulla segnalazione infiammatoria e su vie che aumentano la sensibilità all’insulina, collegando la disponibilità di nutrienti alle risposte cellulari allo stress e alla produzione di citochine. Tra i processi a valle riportati figurano la regolazione della segnalazione MAPK/ERK, le cascate infiammatorie associate a NF-κB e i programmi di differenziamento adipogenico. Un’attività deregolata di FFAR4/GPR120 è stata associata a fenotipi metabolici legati all’obesità, resistenza all’insulina e stati infiammatori cronici, stimolando studi meccanicistici in adipociti, macrofagi e modelli epiteliali.

GPR120 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FFAR4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GPR120 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FFAR4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FFAR4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GPR120. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FFAR4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GPR120 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GPR120 nelle cellule tumorali con espressione di FFAR4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.