GPR119 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433515

Panoramica

Gpr119 codifica GPR119, un GPCR di classe A arricchito nelle cellule delle isole pancreatiche e nelle popolazioni enteroendocrine intestinali, dove si accoppia principalmente alla segnalazione mediata da Gs aumentando i livelli intracellulari di cAMP. Questa via sostiene risposte di “nutrient sensing” che influenzano il rilascio di incretine, la dinamica della secrezione di insulina e, più in generale, la regolazione dell’omeostasi di glucosio e lipidi. Nei tessuti immunitari e metabolici, la segnalazione dipendente da GPR119 è stata associata alla modulazione dell’equilibrio energetico cellulare e al cross-talk ormonale tra intestino e pancreas. La disregolazione delle reti associate a GPR119 è quindi oggetto di studio in relazione a fenotipi metabolici, incluse vie rilevanti per obesità e diabete, nonché alla funzione delle cellule endocrine.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR119 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gpr119 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gpr119 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gpr119 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR119.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gpr119 per lo studio della segnalazione di GPR119, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gpr119 critici per la funzione di GPR119
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gpr119 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR119 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GPR119 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gpr119. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR119 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GPR119 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gpr119 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gpr119 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.