GPNMB Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402966-LAC

GPNMB (proteina B glicoproteica non metastatica del melanoma) è una glicoproteina transmembrana di tipo I, arricchita nelle linee mieloidi e negli osteoclasti, che modula l’adesione e la migrazione cellulare e il rimodellamento della matrice extracellulare. Partecipa a programmi di segnalazione immunitaria e infiammatoria, influenza il traffico lisosomiale e vescicolare e contribuisce a plasmare le risposte di riparazione tissutale attraverso il cross-talk con vie associate alle integrine e ai fattori di crescita. In biologia dei tumori, un’alterata espressione di GPNMB è stata collegata all’invasività delle cellule tumorali, alle interazioni con lo stroma e al rimodellamento del microambiente immunitario, mentre nella neurodegenerazione è associata a stati di microglia attivata e a reti trascrizionali responsivi al danno. Queste caratteristiche rendono GPNMB un nodo utile per analizzare i meccanismi di polarizzazione mieloide, l’osteoimmunologia e i fenotipi cellulari adattativi allo stress in sistemi modello umani.

Le particelle di attivazione lentivirale GPNMB (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GPNMB in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GPNMB (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GPNMB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GPNMB. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GPNMB e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.