GPIHBP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403473-ACT

GPIHBP1 (glycosylphosphatidylinositol anchored high density lipoprotein binding protein 1) è una proteina ancorata al GPI presente sulla superficie delle cellule endoteliali che cattura la lipoprotein lipasi (LPL) e la trasporta nel lume capillare, consentendo l’idrolisi intravascolare delle lipoproteine ricche di trigliceridi. Grazie al suo legame con la LPL e alle interazioni con chilomicroni e VLDL, GPIHBP1 è un elemento centrale della via della lipolisi e della regolazione della clearance dei trigliceridi plasmatici. Alterazioni dell’espressione o della funzione di GPIHBP1 compromettono la localizzazione e l’attività della LPL, contribuendo a fenotipi di dislipidemia caratterizzati da ipertrigliceridemia e difetti nella gestione dei lipidi. Questo gene è quindi ampiamente studiato nel metabolismo lipidico vascolare, nella biologia endoteliale e nei meccanismi che regolano l’elaborazione delle lipoproteine.

GPIHBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GPIHBP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GPIHBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GPIHBP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GPIHBP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GPIHBP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GPIHBP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GPIHBP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GPIHBP1 nelle cellule tumorali con espressione di GPIHBP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.