GnT-II Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407393

Panoramica

MGAT2 codifica la N-acetilglucosaminiltransferasi II (GnT-II), una glicosiltransferasi del Golgi mediale che catalizza una fase chiave nella sintesi degli N-glicani complessi aggiungendo GlcNAc con legame β1,2 al braccio di mannosio α1,6 delle strutture biantennarie. Questa attività influenza la maturazione di glicoproteine che regolano il traffico dei recettori, l’adesione cellula–cellula e la segnalazione dei fattori di crescita, modellando così la proteostasi di membrana e le interazioni extracellulari. Alterazioni della ramificazione e della composizione degli N-glicani dipendenti da MGAT2 sono state associate a una segnalazione cellulare deregolata e a cambiamenti nella migrazione e nell’invasività in contesti rilevanti per il cancro, e sono inoltre collegate a disordini congeniti della glicosilazione che comportano un’alterata elaborazione nel Golgi. Di conseguenza, MGAT2 è spesso studiato nella glicoproteomica, nella biologia della via secretoria e in analisi a livello di pathway del rimodellamento degli N-glicani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GnT-II (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MGAT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MGAT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MGAT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GnT-II.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MGAT2 per lo studio della segnalazione di GnT-II, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MGAT2 critici per la funzione di GnT-II
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MGAT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GnT-II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GnT-II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MGAT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GnT-II Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GnT-II (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MGAT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MGAT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.