GnRH I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401425

Panoramica

GNRH1 codifica l’ormone di rilascio delle gonadotropine I (GnRH I), un decapeptide ipotalamico che avvia una segnalazione pulsatile verso le cellule gonadotrope dell’ipofisi tramite il recettore GnRHR (un GPCR), attivando le vie della fosfolipasi C/IP3–DAG/Ca2+ e la cascata MAPK. Questa segnalazione regola la sintesi e la secrezione dell’ormone luteinizzante e dell’ormone follicolo-stimolante, coordinando la funzione dell’asse riproduttivo, la tempistica puberale e la fertilità. Alterazioni dell’espressione di GNRH1 o della processazione del peptide sono state implicate in disturbi della regolazione dell’asse ipotalamo–ipofisi–gonadi, tra cui l’ipogonadismo ipogonadotropo congenito e fenotipi endocrini riproduttivi correlati. In modelli cellulari e tissutali, GNRH1 viene studiato in relazione alla differenziazione neuroendocrina, alla dinamica della secrezione ormonale e al controllo trascrizionale dei programmi di segnalazione riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GnRH I (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GNRH1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GNRH1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GNRH1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GnRH I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GNRH1 per lo studio della segnalazione di GnRH I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GNRH1 critici per la funzione di GnRH I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GNRH1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GnRH I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GnRH I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GNRH1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GnRH I Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GnRH I (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GNRH1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GNRH1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.