glypican-4 Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-420640-LAC-2

Nel topo, Gpc4 codifica la glicano-4, un proteoglicano di eparan solfato ancorato tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che si localizza sulla superficie cellulare e nella matrice extracellulare per regolare la distribuzione di morfogeni e fattori di crescita. La glicano-4 modula vie di segnalazione che includono Wnt/β-catenina, FGF e BMP, plasmando le interazioni ligando–recettore e stabilendo gradienti che influenzano proliferazione, differenziamento e patterning tissutale durante lo sviluppo. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di Gpc4 sono associate a una segnalazione extracellulare deregolata e sono state studiate in contesti quali l’omeostasi metabolica, la biologia del tessuto adiposo e processi di neurosviluppo, rendendo questo gene rilevante per studi di genetica dei tratti complessi. L’editing genetico di Gpc4 in modelli murini consente inoltre di analizzare i meccanismi della segnalazione dipendente dall’eparan solfato, della comunicazione cellula–cellula e della regolazione della matrice extracellulare in fenotipi legati allo sviluppo e alle malattie.

Le particelle di attivazione lentivirale glypican-4 (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Gpc4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale glypican-4 (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Gpc4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di glypican-4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Gpc4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.