glypican-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400256-ACT

GPC3 codifica o glicano-3, um proteoglicano de sulfato de heparano ancorado por glicosilfosfatidilinositol (GPI), localizado na superfície celular e na interface com a matriz extracelular. O glicano-3 modula a disponibilidade e o alcance de sinalização de morfógenos e fatores de crescimento, influenciando vias como Wnt/β-catenina, Hedgehog, FGF e BMP para regular a proliferação celular, a adesão e o padrão de desenvolvimento. A expressão alterada de GPC3 está associada a crescimento tecidual desregulado e a programas de sinalização oncogênica, sendo amplamente estudada como um regulador dependente do contexto na biologia do fígado e em estados celulares associados a tumores. Essas propriedades fazem de GPC3 um ponto de partida útil para dissecar a sinalização dependente de sulfato de heparano, as interações receptor–ligante e a regulação microambiental de gradientes de fatores de crescimento.

glypican-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

glypican-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de glypican-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de glypican-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via glypican-3 em células tumorais com expressão de GPC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.