Glycodelin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403687-ACT

PAEP codifica la glicodelina, una glicoproteina secreta nota anche come proteina endometriale associata al progesterone, la cui espressione è fortemente regolata da segnali ormonali nei tessuti riproduttivi. La glicodelina contribuisce alla comunicazione cellula-cellula all’interfaccia materno-fetale, modula l’attività delle cellule immunitarie e influenza la differenziazione epiteliale e il rimodellamento tissutale tramite interazioni recettoriali dipendenti dai glicani. Alterazioni dell’espressione di PAEP sono state riportate nella biologia endometriale e ovarica e sono spesso oggetto di studi su impianto, infiammazione e modulazione immunitaria associata ai tumori. In quanto fattore secreto, la glicodelina è anche studiata come potenziale biomarcatore dipendente dal contesto e come nodo meccanicistico che collega la segnalazione endocrina alla tolleranza immunitaria locale.

Glycodelin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PAEP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Glycodelin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PAEP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PAEP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Glycodelin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PAEP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Glycodelin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Glycodelin nelle cellule tumorali con espressione di PAEP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.