Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Plasmide Double Nickase (h): sc-405279-NIC

GPX5 umano codifica la glutatione perossidasi 5, un enzima antiossidante selenio-dipendente che riduce il perossido di idrogeno e gli idroperossidi lipidici utilizzando il glutatione, limitando così il danno ossidativo. L’attività di GPX5 sostiene l’omeostasi redox e contribuisce a contenere gli effetti indotti dallo stress ossidativo sull’integrità delle membrane, sull’ossidazione delle proteine e sulle vie di segnalazione a valle collegate a infiammazione e apoptosi. Sebbene GPX5 sia caratterizzato soprattutto nel tratto riproduttivo maschile, la sua regolazione e funzione antiossidante lo collegano a risposte cellulari più ampie alle specie reattive dell’ossigeno e al danno ossidativo. Un controllo redox disregolato che coinvolge le glutatione perossidasi è spesso studiato in contesti quali infertilità, stress metabolico e biologia tumorale, in cui le specie reattive dell’ossigeno influenzano la stabilità genomica e le decisioni sul destino cellulare.

Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPX5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPX5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPX5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPX5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.