Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401558-LAC

GPX4 (glutatione perossidasi 4) codifica una fosfolipide-idroperossidasi selenio-dipendente che riduce gli idroperossidi lipidici di membrana e limita la propagazione della perossidazione lipidica. In quanto soppressore centrale della ferroptosi, GPX4 collega il metabolismo del glutatione e l’omeostasi redox all’integrità mitocondriale, allo stress ossidativo ferro-dipendente e alla segnalazione infiammatoria. Un’alterata attività di GPX4 è stata associata a una maggiore suscettibilità al danno ossidativo e a programmi di morte cellulare deregolati, implicati nella neurodegenerazione, nel danno da ischemia-riperfusione e nella biologia tumorale. La GPX4 umana è quindi ampiamente studiata nei circuiti che controllano le ROS lipidiche, la riparazione delle membrane e le risposte trascrizionali adattative allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale Glutathione Peroxidase 4/GPX4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GPX4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Glutathione Peroxidase 4/GPX4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GPX4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Glutathione Peroxidase 4/GPX4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GPX4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.