Glutathione Peroxidase 2/GPX2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420663-ACT

Il gene murino Gpx2 codifica la glutatione perossidasi 2 (GPX2), un enzima antiossidante selenio-dipendente che riduce il perossido di idrogeno e i lipid idroperossidi utilizzando il glutatione, contribuendo così a preservare l’equilibrio redox e l’integrità delle membrane. GPX2 è arricchita nei tessuti epiteliali e contribuisce alla detossificazione delle specie reattive dell’ossigeno generate durante il metabolismo, l’infiammazione e l’esposizione a xenobiotici. Attraverso la modulazione dei segnali legati allo stress ossidativo, GPX2 può influenzare vie associate a proliferazione, differenziazione e risposte allo stress, inclusi i programmi antiossidanti regolati da NRF2 e la segnalazione infiammatoria. Un’espressione deregolata di GPX2 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi epiteliale e a fenotipi di danno ossidativo rilevanti per studi su infiammazione, funzione di barriera e biologia tumorale in modelli murini.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gpx2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gpx2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gpx2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Glutathione Peroxidase 2/GPX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gpx2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Glutathione Peroxidase 2/GPX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Glutathione Peroxidase 2/GPX2 nelle cellule tumorali con espressione di Gpx2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.