Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400631

Panoramica

GPX1 codifica la selenoenzima citosolica glutatione perossidasi 1, una delle principali proteine di difesa antiossidante, che riduce il perossido di idrogeno e gli idroperossidi lipidici utilizzando il glutatione come donatore di elettroni. Limitando l’accumulo di specie reattive dell’ossigeno, GPX1 contribuisce a mantenere l’omeostasi redox e influenza reti di segnalazione legate alle risposte allo stress ossidativo, inclusi i programmi regolati da NRF2, la funzione mitocondriale e le vie infiammatorie. Alterazioni dell’attività di GPX1 sono state associate a meccanismi rilevanti per la biologia del cancro, la disfunzione metabolica, la neurodegenerazione e le patologie cardiovascolari, in cui lo squilibrio redox può rimodellare la sopravvivenza cellulare e i fenotipi di adattamento allo stress. Essendo un enzima espresso in modo ampio, GPX1 è spesso utilizzato per studiare come la capacità antiossidante moduli le risposte al danno al DNA, la sensibilità alla ferroptosi e le risposte cellulari all’ipossia o a segnali infiammatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Glutathione Peroxidase 1/GPX1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPX1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPX1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPX1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Glutathione Peroxidase 1/GPX1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPX1 per lo studio della segnalazione di Glutathione Peroxidase 1/GPX1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPX1 critici per la funzione di Glutathione Peroxidase 1/GPX1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPX1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Glutathione Peroxidase 1/GPX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Glutathione Peroxidase 1/GPX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPX1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Glutathione Peroxidase 1/GPX1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPX1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPX1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.