Glut12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-436139

Panoramica

Slc2a12 codifica il trasportatore del glucosio 12 (GLUT12), un trasportatore facilitativo di esosi che supporta l’assorbimento di glucosio basale e responsivo all’insulina, a seconda del tipo cellulare e dello stato metabolico. Nei tessuti murini, GLUT12 contribuisce all’omeostasi del glucosio a livello cellulare e si integra con le vie che controllano l’utilizzo dell’energia, tra cui glicolisi, metabolismo del glicogeno e segnalazione insulina/PI3K–AKT. Alterazioni dell’espressione o del traffico di Slc2a12 sono state associate ad adattamenti metabolici nei tessuti sensibili all’insulina e possono influenzare fenotipi legati a obesità, insulino-resistenza e risposte allo stress cardiometabolico correlato. Lo studio della funzione di Glut12 aiuta a chiarire come i diversi membri della famiglia GLUT ripartiscano il flusso di glucosio tra i tessuti e come la ridondanza dei trasportatori contribuisca alla resilienza metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Glut12 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc2a12 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc2a12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc2a12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Glut12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc2a12 per lo studio della segnalazione di Glut12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc2a12 critici per la funzione di Glut12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc2a12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Glut12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Glut12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc2a12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Glut12 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Glut12 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc2a12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc2a12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.