Plasmide CRISPR d'Activation (h) GluR-δ2: sc-403400-ACT

GRID2 code le récepteur ionotrope du glutamate delta-2 (GluR-δ2), une protéine apparentée à un récepteur, enrichie dans le cervelet, essentielle à l’organisation des synapses excitatrices et à la plasticité synaptique. Plutôt que de fonctionner comme un canal classique activé par un ligand, GluR-δ2 agit comme organisateur synaptique au niveau des synapses entre les fibres parallèles et les cellules de Purkinje, en coordonnant des complexes de signalisation des récepteurs et un remodelage dépendant de l’activité. Il contribue à des processus tels que la dépression à long terme, la maturation des épines dendritiques et le développement des circuits cérébelleux via des réseaux de signalisation glutamatergique. Une dérégulation de GRID2 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs caractérisés par un dysfonctionnement cérébelleux, notamment des voies liées à l’ataxie.

GluR-δ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GRID2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GluR-δ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GRID2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GRID2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GluR-δ2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GRID2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GluR-δ2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GluR-δ2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GRID2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.