GluR-6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402982-ACT

GRIK2 codifica per la subunità del recettore ionotropico del glutammato GluR-6 (detta anche subunità 2 del recettore del kainato), un canale cationico regolato da ligando che media una rapida neurotrasmissione eccitatoria nel sistema nervoso centrale. I recettori contenenti GluR-6 regolano la trasmissione sinaptica e la plasticità attraverso il flusso di Na⁺/K⁺ e la segnalazione del Ca²⁺ dipendente dall’attività, influenzando l’eccitabilità neuronale e lo sviluppo dei circuiti. Modulando la depolarizzazione postsinaptica e le cascate di segnalazione a valle, GRIK2 partecipa a vie che controllano l’apprendimento, le oscillazioni di rete e le risposte allo stress eccitotossico. La disregolazione genetica e funzionale della segnalazione dei recettori del kainato è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, nonché a una maggiore suscettibilità alle crisi epilettiche, rendendo GRIK2 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici nelle neuroscienze.

GluR-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GRIK2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GluR-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GRIK2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GRIK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GluR-6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GRIK2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GluR-6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GluR-6 nelle cellule tumorali con espressione di GRIK2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.