GluR-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403848-ACT

GRIA3 codifica la subunità GluR-3 del recettore del glutammato di tipo AMPA, un determinante fondamentale della rapida trasmissione sinaptica eccitatoria nel sistema nervoso centrale. In quanto canale ionico controllato da ligando, GluR-3 contribuisce a flussi di Na⁺/Ca²⁺ dipendenti dall’attività, modellando la depolarizzazione neuronale, la plasticità sinaptica e l’eccitabilità dei circuiti. La funzione di GRIA3 si intreccia con programmi di segnalazione glutamatergica che regolano il potenziamento a lungo termine/la depressione a lungo termine e le risposte trascrizionali a valle dipendenti dal calcio. Un’alterazione della composizione o del traffico dei recettori AMPA è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, a supporto dell’indagine di GRIA3 nella differenziazione neuronale, nell’attività di rete e in stati di segnalazione rilevanti per la malattia.

GluR-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GRIA3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GluR-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GRIA3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GRIA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GluR-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GRIA3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GluR-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GluR-3 nelle cellule tumorali con espressione di GRIA3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.