Glucose Transporter Glut8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403183-ACT

SLC2A8 kodiert den erleichterten Glukosetransporter GLUT8, einen intrazellulären und mit der Plasmamembran assoziierten Carrier, der zur Aufnahme und Umverteilung von Hexosen in metabolisch aktiven Zellen beiträgt. GLUT8 unterstützt die zelluläre Energiehomöostase, indem er die Glukoseverfügbarkeit für Glykolyse, Glykogenstoffwechsel und umfassendere Nährstoffsensorik-Programme reguliert und dabei mit Signalwegen zusammenwirkt, die Insulinantworten und Organellentransport koordinieren. Veränderungen der SLC2A8-Expression oder -Lokalisierung wurden im Zusammenhang mit metabolischer Dysregulation, Reaktionen auf oxidativen Stress und gewebespezifischer Brennstoffnutzung untersucht. In der biomedizinischen Forschung wird GLUT8 eingesetzt, um zu untersuchen, wie Transporter-Menge und subzelluläre Kompartimentierung Zellwachstum, Differenzierung und Substratpräferenz beeinflussen.

Glucose Transporter Glut8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC2A8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Glucose Transporter Glut8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC2A8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC2A8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Glucose Transporter Glut8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC2A8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Glucose Transporter Glut8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Glucose Transporter Glut8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC2A8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.