Glucose Transporter Glut3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400584-LAC

SLC2A3 codifica il trasportatore di glucosio GLUT3 (Glut3), un trasportatore facilitato del glucosio ad alta affinità che sostiene il metabolismo energetico cellulare mediando l’assorbimento di glucosio basale e indotto da stress. GLUT3 contribuisce al flusso glicolitico e collega la disponibilità di nutrienti a processi a valle, inclusi la respirazione mitocondriale, l’equilibrio redox e i programmi di sopravvivenza cellulare, con ruoli di rilievo in contesti ad alta richiesta metabolica come la funzione dei neuroni e delle cellule immunitarie. Un’alterata espressione di SLC2A3 è stata associata alla riprogrammazione metabolica e a vie adattative all’ipossia, incluse interazioni con la segnalazione HIF-1 e con l’utilizzo dei nutrienti regolato dall’asse PI3K–AKT–mTOR. Un’attività deregolata di GLUT3 è quindi rilevante negli studi su infiammazione, neurobiologia e metabolismo delle cellule tumorali, in cui il trasporto di glucosio può influenzare proliferazione, differenziamento e risposte allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale Glucose Transporter Glut3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SLC2A3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Glucose Transporter Glut3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SLC2A3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Glucose Transporter Glut3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SLC2A3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.