GLP-2R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403966-ACT

GLP2R codifica il recettore del peptide glucagone-simile 2 (GLP-2R), un GPCR di classe B espresso prevalentemente nei tessuti intestinali ed enterici, dove rileva l’ormone incretinico GLP-2. In seguito al legame con il ligando, il GLP-2R si accoppia principalmente a Gs, aumentando i livelli di cAMP e attivando programmi trascrizionali associati a PKA e CREB che regolano la crescita dell’epitelio, l’integrità della barriera, l’assorbimento dei nutrienti e la riparazione della mucosa. La segnalazione a valle interseca vie che controllano sopravvivenza e proliferazione cellulare, incluse le cascata MAPK e processi collegati a PI3K, contribuendo all’omeostasi intestinale e alla comunicazione neuroendocrina. Una segnalazione GLP2R deregolata è stata studiata in contesti di infiammazione gastrointestinale, malassorbimento e rimodellamento epiteliale alterato, a supporto di ricerche meccanicistiche sulla funzione della barriera intestinale e sulla fisiologia metabolica.

GLP-2R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GLP2R senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GLP-2R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GLP2R nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GLP2R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GLP-2R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GLP2R nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GLP-2R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GLP-2R nelle cellule tumorali con espressione di GLP2R silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.