Plasmide Double Nickase (m) GLP-1R: sc-420581-NIC

Glp1r code le récepteur murin du peptide‑1 de type glucagon (GLP‑1R), un GPCR de classe B qui répond aux hormones incrétines afin de réguler la sécrétion d’insuline dépendante du glucose et, plus largement, l’homéostasie métabolique. Après liaison du ligand, le GLP‑1R active la production d’AMPc médiée par Gs ainsi que les voies de signalisation PKA/EPAC en aval, influençant l’activité des canaux ioniques, l’exocytose vésiculaire et les programmes transcriptionnels dans les îlots pancréatiques, ainsi que les circuits de la satiété et de l’équilibre énergétique. La signalisation du GLP‑1R s’articule avec les voies PI3K/AKT et MAPK, reliant la détection des nutriments à la survie cellulaire et aux réponses adaptatives. Une dérégulation de la signalisation dépendante de Glp1r est pertinente dans des modèles expérimentaux de diabète, d’obésité et de physiologie cardiométabolique, ce qui en fait une cible utile pour disséquer le contrôle endocrinien et neuroendocrinien du métabolisme.

GLP-1R Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Glp1r dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Glp1r. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Glp1r. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Glp1r.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.