GLP-1R Plasmide Double Nickase (m): sc-420581-NIC

Glp1r codifica il recettore murino del peptide-1 simile al glucagone (GLP-1R), un GPCR di classe B che risponde agli ormoni incretinici regolando la secrezione di insulina glucosio-dipendente e, più in generale, l’omeostasi metabolica. Dopo il legame del ligando, GLP-1R attiva la produzione di cAMP mediata da Gs e la segnalazione a valle PKA/EPAC, influenzando l’attività dei canali ionici, l’esocitosi delle vescicole e i programmi trascrizionali nelle isole pancreatiche, nonché i circuiti della sazietà e del bilancio energetico. La segnalazione di GLP-1R interagisce con le vie PI3K/AKT e MAPK, collegando il rilevamento dei nutrienti alla sopravvivenza cellulare e a risposte adattative. La disregolazione della segnalazione dipendente da Glp1r è rilevante in modelli sperimentali di diabete, obesità e fisiologia cardiometabolica, rendendolo un bersaglio utile per analizzare il controllo endocrino e neuroendocrino del metabolismo.

GLP-1R Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Glp1r nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Glp1r. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Glp1r. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Glp1r interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.