GIPR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402895-ACT

ヒトGIPRは、グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（GIP）受容体をコードしており、膵島やその他の代謝活性の高い組織に発現するクラスBのGPCRです。主にGsに共役してcAMPを増加させ、PKA/CREB依存性の転写を活性化します。GIPRシグナルは、グルコース刺激性インスリン分泌、β細胞の生存、栄養素により駆動される同化（アナボリック）プログラムを調節し、さらにPI3K/AKTやERK/MAPK経路とのクロストークを介して細胞増殖やストレス応答にも影響します。GIPRの発現やシグナル伝達の変化は、肥満や2型糖尿病に関連する表現型など、代謝異常に関与するとされ、内分泌系の系譜状態を示すマーカーとしても用いられます。そのためGIPRは、ホルモン受容体生物学、膵島機能、ならびに代謝疾患の機序に関わるcAMP制御遺伝子ネットワークの研究において広く解析されています。

GIPR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GIPRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GIPR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GIPR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGIPR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GIPRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGIPR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGIPR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGIPR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGIPR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。