GI24 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-407831-LAC

VSIR codifica GI24, noto anche come VISTA, una proteina immunoregolatoria transmembrana di tipo I arricchita nelle linee mieloidi e in altre cellule presentanti l’antigene. GI24 funziona come molecola di checkpoint immunitario che modula l’attivazione delle cellule T, la produzione di citochine e la tolleranza periferica, plasmando il tono infiammatorio nei microambienti tissutali. La sua attività è collegata alla regolazione della presentazione dell’antigene e di programmi di segnalazione a valle che influenzano il dialogo tra cellule immunitarie, incluse le vie che governano le risposte trascrizionali agli stimoli infiammatori. Un’alterata espressione di VSIR e la segnalazione mediata da GI24 sono state associate all’elusione immunitaria e a un’infiammazione disregolata in contesti di cancro e di malattie immunomediate, a sostegno della sua utilità come nodo meccanicistico per la ricerca in immunologia.

Le particelle di attivazione lentivirale GI24 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di VSIR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GI24 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione VSIR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GI24. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo VSIR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.