GFRα-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404010-ACT

GFRA2 codifica per il recettore umano della famiglia GDNF alfa-2 (GFRα-2), un co-recettore ancorato tramite GPI che lega la neurturina e ligandi correlati per facilitare la segnalazione del recettore tirosin-chinasico RET. Questo complesso recettoriale regola il supporto neurotrofico, la differenziazione neuronale, la guida assonale e la sopravvivenza attraverso vie quali MAPK/ERK e PI3K/AKT, e può influenzare la migrazione cellulare e la crescita dei neuriti in tessuti in sviluppo e maturi. L’alterazione dell’espressione di GFRA2 è stata studiata nel contesto della biologia del neurosviluppo e della neurodegenerazione, e una segnalazione deregolata lungo l’asse RET è rilevante per diverse aree di ricerca sulle neoplasie e sul sistema nervoso periferico. In quanto determinante di superficie della risposta ai ligandi, GFRα-2 è spesso utilizzato per interrogare la dinamica della segnalazione dei fattori trofici, l’assemblaggio del complesso recettoriale e i programmi trascrizionali a valle.

GFRα-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GFRA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GFRα-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GFRA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GFRA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GFRα-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GFRA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GFRα-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GFRα-2 nelle cellule tumorali con espressione di GFRA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.