Gelsolin Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-432743-ACT

Il gene murino **Gsn** codifica la **gelsolina**, una proteina multifunzionale che si lega all’actina e che recide, cappuccia e nuclea i filamenti di actina, contribuendo a controllare il rimodellamento del citoscheletro. Regolando la dinamica dell’actina a valle della segnalazione del calcio e delle interazioni con i fosfoinositidi, la gelsolina influenza i cambiamenti di forma cellulare, la migrazione, l’adesione, l’endocitosi e i processi di riparazione della membrana simili alla guarigione di una ferita. L’attività della gelsolina si intreccia con vie che governano la meccanotrasduzione e il comportamento delle cellule infiammatorie, rendendo l’espressione e la regolazione di **Gsn** rilevanti per studi sul rimodellamento tissutale, la neuroinfiammazione e i fenotipi di motilità associati ai tumori. Livelli alterati di gelsolina sono stati riportati in diversi contesti patologici in cui l’organizzazione del citoscheletro di actina e le risposte allo stress risultano compromesse.

Gelsolin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gsn senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Gelsolin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gsn nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gsn, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Gelsolin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gsn nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Gelsolin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Gelsolin nelle cellule tumorali con espressione di Gsn silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.