GDF-9 Plasmide Double Nickase (h): sc-402257-NIC

GDF9 codifica il fattore di differenziazione della crescita 9 (GDF-9), un ligando della superfamiglia TGF-β secreto dall’ovocita che segnala principalmente attraverso complessi recettoriali BMP/TGF-β per attivare programmi trascrizionali dipendenti da SMAD2/3. È un regolatore paracrino fondamentale della proliferazione delle cellule della granulosa, dell’espansione del cumulo e della comunicazione bidirezionale tra ovocita e cellule somatiche, che supporta la follicologenesi e la competenza ovocitaria. L’attività di GDF-9 interagisce con il rimodellamento della matrice extracellulare e con vie di differenziamento che coordinano la maturazione del follicolo ovarico e l’ovulazione. Un’espressione o una funzione deregolata di GDF9 è associata a uno sviluppo follicolare compromesso e a fenotipi endocrini riproduttivi, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici nella biologia ovarica.

GDF-9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GDF9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GDF9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GDF9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GDF9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.