GDF-5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403202-LAC

Il fattore di differenziazione della crescita 5 (GDF5) codifica GDF-5, un ligando secreto della superfamiglia TGF-β che segnala principalmente attraverso i recettori BMP di tipo I/II, attivando programmi trascrizionali dipendenti da SMAD1/5/8. GDF-5 regola la condensazione mesenchimale, la differenziazione condrogenica e la morfogenesi di articolazioni e tendini/legamenti, influenzando la produzione di matrice extracellulare e il patterning scheletrico. Nei tessuti adulti contribuisce all’omeostasi della cartilagine e alle risposte cellulari associate alla riparazione, intersecandosi con il cross-talk delle vie BMP/TGF-β che modella la segnalazione infiammatoria e fibrotica. La variazione genetica o un’espressione deregolata di GDF5 è stata collegata ad alterazioni dello sviluppo scheletrico e a una maggiore suscettibilità a fenotipi articolari degenerativi, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici nella biologia muscoloscheletrica.

Le particelle di attivazione lentivirale GDF-5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GDF5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GDF-5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GDF5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GDF-5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GDF5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.